胰腺导管腺癌（PDAC）是一种恶性程度高的肿瘤，多数患者在确诊时已处于晚期，失去手术机会。目前以白蛋白紫杉醇联合吉西他滨（AG方案）为代表的化疗是晚期PDAC的首选治疗手段之一，然而患者对该治疗反应差异大，耐药现象普遍，其深层机制尚待阐明。肿瘤微环境（TME）被认为在PDAC化疗耐药中扮演关键角色，其中肿瘤细胞的可塑性及其与免疫、基质细胞的相互作用亟待深入解析。本研究纳入28例接受AG方案治疗的晚期PDAC患者，采集治疗前后配对肿瘤穿刺样本及外周血样本，整合单细胞RNA测序（scRNA-seq）、TCR/BCR测序以及空间转录组学等多组学技术，构建了高分辨率单细胞图谱，从单细胞和空间层面揭示了化疗过程中肿瘤细胞状态与免疫生态的重构轨迹。

研究结果显示，化疗疗效与肿瘤细胞命运及免疫格局密切相关。在疗效良好者中，肿瘤细胞总体比例明显下降，经典型（classical）肿瘤细胞比例上升，同时FOLR2⁺抗肿瘤巨噬细胞和具有细胞毒功能的CD8⁺ T细胞显著增加；而在疗效不佳者中，基底样（basal-like）肿瘤细胞明显富集，SPP1⁺肿瘤相关巨噬细胞和耗竭型CD8⁺ T细胞显著增加，免疫抑制性微环境特征显著。进一步拟时序与转录功能学分析发现，处于中间状态（intermediate co-expressor state）的肿瘤细胞在化疗压力下发生分化偏移：在疗效不佳者中更倾向耐药性的基底样状态转化，而在疗效良好者中则偏向对化疗更敏感的经典型状态分化，揭示了肿瘤细胞命运决定与化疗疗效差异之间的内在联系。

在机制层面，研究团队发现免疫检查点分子CD276/B7-H3为关键调控节点。研究证实，CD276在基底样及中间状态肿瘤细胞中高表达，并在化疗后进一步上调，其表达水平与患者不良预后显著相关。空间转录组学和多重免疫荧光结果进一步揭示CD276⁺基底样肿瘤细胞与SPP1⁺巨噬细胞及耗竭CD8⁺ T细胞在空间上高度共定位，三者形成紧密互作网络，共同构建促血管生成和免疫抑制并存的耐药微环境，为化疗耐药提供了关键的结构性基础。

围绕CD276/B7-H3的功能作用，研究团队在体内外模型中开展系统验证。结果显示，敲低或敲除CD276可显著增强肿瘤细胞对吉西他滨的敏感性；在KPC小鼠模型中，抗B7-H3抗体联合化疗显著抑制肿瘤生长并延长生存时间。同时，B7-H3阻断能够降低肿瘤细胞的基底样特征，减少SPP1⁺巨噬细胞浸润及T细胞耗竭水平，并增强CD8⁺ T细胞的杀伤功能，从而在“肿瘤细胞–免疫细胞”双层面逆转耐药趋势。

综上所述，本研究在单细胞与空间维度层面系统揭示了胰腺癌化疗过程中肿瘤细胞可塑性与免疫微环境重塑的关键机制，首次阐明了CD276/B7-H3在驱动肿瘤细胞基底样转化与微环境免疫抑制中的双重调控功能。为发展化疗联合抗CD276/B7-H3的精准干预策略、克服胰腺癌化疗耐药提供了重要理论依据和潜在治疗方向。

叶幼琼，研究员，博士生导师。上海交通大学医学院上海市免疫学研究所，肿瘤微环境与肿瘤免疫课题组长（http://www.yelab.site/）。课题组围绕肿瘤空间微环境，特别是肿瘤边界，以生物大数据为驱动，构建算法、工具开发，结合生物信息创新方法、基础实验、临床队列等多尺度手段阐释肿瘤微环境中重要调控因子对肿瘤进展、免疫逃逸作用机制、并利用多维数据构建免疫治疗疗效预测模型，相关研究为免疫治疗提供了新策略。最近三年的相关研究成果以通讯（含共同通讯）作者发表在Cancer Research、Nature Communications、Journal of Hepatology、Immunity等期刊。叶幼琼课题组长期招收博士后，具有生物信息学和肿瘤免疫学等相关背景优先，欢迎更多优秀的人才（包括博士后等）加入。请感兴趣的申请者来函咨询:youqiong.ye@shsmu.edu.cn。