上海交通大学医学院实验动物屏障饲养设施应每3个月一次对屏障内微生物等级进行监控。具体检测项目包括：空气沉降菌检测以及操作台、笼架、风淋室表面细菌检测。

空气沉降菌检测—采样：

a) 根据“GB 14925-2010 实验动物环境及设施”规定，对动物设施空气沉降菌检测的检测点选择方式为：每5-10m²设置一个检测点，将培养皿至于区域中间的地板上。采样底边应避开室内或走廊的出风口，空调出风口。详细记录采样房间编号。

b) 检测时，为保证与沉降菌的充分接触，使用直径90mm平皿，根据“GB 14925-2010”标准：每个检测的平皿应放置30分钟。

c) 采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6小时，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24小时。

空气沉降菌检测—菌落培养：

a) 在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃ 培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

b) 将已采集样品的培养基在6小时内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养24小时观察结果，计数平板上细菌菌落数。

空气沉降菌检测—菌落计算：

a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。

b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

c) 根据“GB 14925-2010 实验动物环境及设施”标准，屏障系统CFU/0.5小时.90mm 平皿的落下菌计数不用超过3个。

操作台、笼架、风淋室表面检测—采样：

a) 使用接触平皿（RODAC）采样：取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖

b) 每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。如台面2个采样点，笼架2个采样点，风淋室2个采样点

c) 取样后，应立即用75%酒精喷洒被取样表面，以除去残留琼脂

操作台、笼架、风淋室表面检测—细菌的检测培养：

a) 收好的营养琼脂接触碟在30-35℃培养3天。

操作台、笼架、风淋室表面检测—细菌总数：

a) 接触平皿的有效接触面积为25 cm²。

b) 结果报告：报告每25cm²操作台、笼架、风淋室表面的菌落数。

工作台表面细菌菌落总数目前无相应的实验动物国家标准，因此根据其他行业国家标准现拟定为：5-25 cfu/cm²为可接受范围。

偏差纠正，一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：

a) 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；

b) 回顾最近一次的沉降菌的检测结果；

c) 检查人员的更衣程序是否正确；

d) 检查清洁设备和消毒剂的质量；

e) 查看操作员工的培训记录。

洁净区表面微生物的趋势分析：每年应对屏障区域菌落检测结果进行趋势分析。如果发现微生物有增加的趋势，应立即展开调查。根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。